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如何对exosomes进行成分分析
更新时间:2024-04-26 03:48:20
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如何对exosomes进行成分分析

李训涛回答:
  外泌体(Exosomes)是一种直径在40~100nm的圆形单层膜结构,可由机体众多类型细胞释放,并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中.外泌体可携带多种蛋白质、mRNA、miRNA,参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程.2007年,Valadi等发现细胞分泌的外泌体中含有生物学活性的mRNA、microRNA,使得研究人员对外泌体的研究热情激增.   传统的外泌体分离要涉及超速离心,操作繁琐、过程冗长,所得到的外泌体纯度较低.美国101Bio提供的系列外泌体分离试剂盒,可从细胞培养基或血清中富集大量完整的外泌体,试剂盒具有   ü方便——无需超速离心;   ü快捷——不到2个小时即可完成外切体分离纯化;   ü高回收率——是超速离心的5~10倍;   ü高纯度——所得外切体纯度高达95%以上;   ü仅需2ml的细胞培养基或200ul血清,即可获得足够的外切体用于下游研究.   PureExo®ExosomesIsolationKitforCellCultureMedia   试剂盒组分   SolutionA、SolutionB、SolutionC和PureExo®Columns   操作步骤   1.无血清培养或血清饥饿48小时的细胞培养液于4℃600g离心10mins取上清;   2.在玻璃管中按照比例加入细胞上清液及ABC混合液摇匀;   3.于4℃孵育1h后出现分层;   4.弃上层培养基,并将其余液体转移至EP管;   5.1000g离心3mins,出现分层,弃上层培养基及下层无色澄清液体;   6.上述步骤重复操作一次;   7.室温干燥5~10mins后用1XPBS重悬;   8.重悬液转移至纯化柱中,2000g离心5mins;   9.收集流出液即为外切体.
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