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【基因工程中pIJ702是一种常用质粒(图1),其中tsr为硫链丝菌素(一种抗生素)抗性基因,mel是黑色素合成基因,其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落;而限制酶CLaⅠ、BglⅡ、PstⅠ、Sac】
更新时间:2024-04-25 12:08:43
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问题描述:

基因工程中pIJ702是一种常用质粒(图1),其中tsr为硫链丝菌素(一种抗生素)抗性基因,mel是黑色素合成基因,其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落;而限制酶CLaⅠ、BglⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列.

pIJ702pZHZ8
BglⅡ5.7kb6.7kb
ClaⅠ5.7kb2.2kb,4.5kb
PstⅠ5.7kb1.6kb,5.1kb
(1).以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换pIJ702上0.4kb(1kb=1000对碱基)的SacⅠ/SphⅠ片段,构成重组质粒pZHZ8.上述两种质粒的限制酶酶切片段长度列在表4中.由此判断目的基因的片段有___kb,以上的操作还需要的一种工具酶是___.

(2)重组质粒pZHZ8上的标记基因是___,含有重组质粒pZHZ8的菌落呈___色.

(3)若要检测重组质粒pZHZ8上的目的基因,可以用___作探针进行杂交.

陈燕飞回答:
  (1)由于用BglⅡ等酶切割后,pIJ702长度为5.7kb,而pZHZ8长度都为6.7kb,增加了1kb;而目的基因置换pIJ702上0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段,所以目的基因的片段有1.4kb.形成重组质粒需要DNA连接酶将目的基因和质粒连接起来.   (2)重组质粒pZHZ8上的标记基因是tsr基因,mel是黑色素合成基因,其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落,由于mel基因部分被替换后,链霉菌菌落不能变黑,而成为白色.   (3)若要检测重组质粒pZHZ8上的目的基因,可以用放射性同位素标记的目的基因作探针进行杂交.   故答案为:   (1)1.4DNA连接酶   (2)tsr基因   白   (3)放射性同位素标记的目的基因
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